來源：凌宏
發布時間：2023.12.08
準備：首先將內層滅菌桶取出，在向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。一般來說，每次滅菌前都應加水。
放回滅菌內桶，并裝入待滅菌物品：將準備滅菌的培養基及空玻璃器皿用牛皮紙包好，裝入鍋內套層中。
加蓋：先檢查鍋蓋上的密封圈是否良好，并去除污物，再將鍋蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內，然后蓋嚴鍋蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。也有些不是用螺栓，而是像家庭使用的高壓鍋一樣，只要將鍋蓋與鍋的槽口對準，順時針轉動，卡到位即可。
用電爐或煤氣加熱(大部分用電熱管加熱)，并同時打開排氣閥，以便鍋內水沸騰后排出鍋內的冷空氣。這里要特別注意，滅菌鍋內冷空氣的排除是否完全極為重要。因為空氣的膨脹壓力大于水蒸汽的膨脹壓力，所以當水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含有空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。通常應等鍋內水燒開后排氣3~5min，待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。另一種排除冷空氣的方法是：按上述方法蓋緊鍋蓋，加熱使鍋內產生蒸汽。當壓力表指針達到33.78kPa時，打開排氣閥將冷空氣排出，此時壓力表指針下降。當指針下降至零時，冷空氣排盡，關上排氣閥。當鍋內壓力上升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。
達到滅菌所需時間后，切斷電源或關閉煤氣。讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力下降到0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開鍋蓋，10min后取出滅菌物品。千萬要注意，如果壓力未降到0就打開排氣閥，會因鍋內壓力突然下降，使容器內的液體由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生污染。